高效液相色谱仪为一种高精密仪器，在使用过程中如果不按照正确的方式操作，很容易会导致一些棘手的小问题，影响分析结果和产品质量控制。其中最常见的问题包括柱压、基线漂移、峰形异常等。液相色谱仪系统主要由贮液瓶、泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器和控制与数据处理软件组成，对于整个系统而言，柱子、泵和检测器是核心部件同时也是易出问题的主要部位。

本文针对色谱图的异常问题进行了整理，并给出了解决方法，供大家参考。

1.基线不平

可能原因及其排除方法：

可能原因：流动相在线混合不均匀/混合器失效

排除方法：先预混合再超声，再使用单泵流路

可能原因：污染物积聚（如溶剂变质、储瓶脏）

排除方法：冲洗柱；更换溶剂；洗针；洗瓶

可能原因：原先的流动相未完全置换

排除方法：用过渡溶剂置换（如异丙醇）

可能原因：样品中强保留化合物进入检测器

排除方法：强洗脱剂冲洗柱子

可能原因：流通池污染

排除方法：用异丙醇/不同极性的溶剂分别冲洗流通池

2. 负峰

可能原因及其排除方法：

可能原因：光学系统没平衡

排除方法：参见仪器使用手册

可能原因：流动相本底吸收高

排除方法：使用紫外截止波长外的流动相

3. 鬼峰

可能原因及其排除方法：

可能原因：流动相污染

排除方法：更换流动相

可能原因：流动相中含有稳定剂

排除方法：使用无防腐剂溶剂

可能原因：柱污染

排除方法：清洗/更换柱

可能原因：进样装置污染

排除方法：清洗/更换进样装置

4. 双峰

可能原因及其排除方法：

可能原因：样品量过大

排除方法：减少上样量

可能原因：进样溶剂过强

排除方法：使用较弱的进样溶剂或流动相

可能原因：滤芯堵塞

排除方法：进样前过滤

5. 拖尾峰

可能原因及其排除方法：

可能原因：存在未扫的死体积

排除方法：减少接头的数量，确保进样器密封垫紧密，确保接头正确固定，用短、窄内径细管

可能原因：碱性化合物-硅醇（羟基）相互作用

排除方法：换色谱柱填料

可能原因：碱性基质-硅醇（羟基）相互作用

排除方法：用更强的流动相/添加竞争碱（如三甲胺）

6. 峰展宽

可能原因及其排除方法：

可能原因：进样量过大

排除方法：减少进样量/降低进样溶剂强度以集中溶剂

可能原因：进样阀中的峰扩散

排除方法：在进样前/后引入气泡以减少扩散

可能原因：数据系统的采样速率过低

排除方法：增大采样

可能原因：流动相粘度过高

排除方法：提高柱温

可能原因：保留时间长

排除方法：使用梯度洗脱或较强的流动相

可能原因：对于流动相来说样品溶剂强

排除方法：用流动相溶解样品；用弱溶剂稀释；减少上样量

7. 压力波动

可能原因及其排除方法：

可能原因：单向阀泄漏或失效

排除方法：拆卸并超声清洗或更换单向阀

可能原因：溶剂入口过滤芯堵塞

排除方法：更换/用硝酸浸泡，再用水充分冲洗至中性

可能原因：微粒积聚

排除方法：过滤样品和流动相；在线过滤器

可能原因：流动相/泵内有气泡

排除方法：溶剂脱气；打开阀，大流量冲洗

可能原因：水/有机系统-缓冲液沉淀

排除方法：测试缓冲液-有机混合物；确保兼容性

可能原因：管路或泵头密封垫泄漏

排除方法：检查并确保管路连接/换密封圈

8. 保留时间变动

可能原因及其排除方法：

可能原因：柱温不断变化

排除方法：使柱恒温；绝缘；保证实验室温度恒定

可能原因：污染积聚

排除方法：冲洗色谱柱至平衡

可能原因：流动相有机相/pH调节的酸碱挥发

排除方法：确保流动相容器盖好；制备新的流动相

可能原因：缓冲能力不足

排除方法：用＞20mM浓度的缓冲液 

可能原因：流动相某一组分较低，混合不匀

排除方法：如不是梯度洗脱，可先预混合使用单泵